点击图片查看原图
孔雀石绿（Malachite Green），又名碱性绿、孔雀绿，化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷，商品孔雀石绿以孔雀石绿草酸盐、孔雀石绿盐酸盐或孔雀石绿氯化物的形式存在，是一种带有金属光泽的绿色结晶体，常用为杀真菌剂或者染料。长期以来，渔民在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿，以预防鱼类的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，同时可以延长鳞受损的鱼的生命。科研结果表明，孔雀石绿在鱼体内残留时间很长，且具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。有鉴于此，许多国家将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。2002年5月，我国也将孔雀石绿列入《动物食品禁用的兽药及其化合物清单》中。但是，因其廉价，且治病是其他药物“不能替代”的，故利益的驱动使得孔雀石绿并没有完全退出渔业市场。
结晶紫，是甲基紫（Methyl Violet）的俗称，又名龙胆紫，是一类三苯基甲烷类工业染料和消毒防腐药，有较好的杀菌作用，具有高效、廉价、易得等优点，作为化学消毒剂被广泛应用于水产养殖疾病防治中。结晶紫具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，各国也已禁止其在水产养殖业中使用。
天瑞仪器一直致力于为客户提供更完善的解决方案，LC-310高效液相色谱仪可同时用于水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的检测。
1.仪器简介
LC-310高效液相色谱仪是天瑞仪器多年液相色谱研发经验的结晶，具有较高的灵敏度、分离度和可靠性。
图1. LC-310高效液相色谱仪外观图
2. 实验部分
2.1检测原理
将样品中残留的孔雀石绿和结晶紫用硼氢化钾还原为其相应的代谢产物隐性孔雀石绿和隐性结晶紫，用乙腈-乙酸铵缓冲溶液混合提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，液相色谱-荧光检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。
2.2主要仪器、耗材和试剂
LC-310高效液相色谱仪（配套荧光检测器）：江苏天瑞仪器股份有限公司；
分析天平：精度十万分之一（BT 125D，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）
超声波清洗器（SK40Y，张家港市神科超声电子有限公司）；
超纯水机（Milli-Q Advantage A10，美国默克密理博公司产品）；
旋转蒸发仪（RE-3000A，上海亚荣生化仪器厂）；
数显高速分散均质机(FJ300-S，上海索映仪器设备有限公司)
固相萃取装置（Supelco12，北京恒奥德仪器仪表有限公司）；
固相萃取柱（Cleanert PRS，500mg/3ml，博纳艾杰尔科技）；
漩涡振荡器等（QL-866，海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。
2.3仪器测试条件
色谱柱：TR C18-X，4.6mm*250mm，5μm（江苏天瑞仪器股份有限公司）；
流动相：乙腈+乙酸铵缓冲液（0.125mol/l，PH4.5）=80+20
柱流量： 1.3ml/min；
柱温： 35℃；
进样量：20μl；
检测器：荧光检测器
激发波长：265nm，发射波长：360nm；
图2.孔雀石绿和结晶紫标准溶液色谱图
三、小结
LC-310高效液相色谱仪测定水产品中孔雀石绿和结晶紫的残留量，灵敏度高，样品干扰小，本方法条件下的孔雀石绿和结晶紫的方法检出限均不超过0.5μg/kg，完全满足国标及水产行业的管控要求。
